基于384孔板重新定义ELISA分析技术

基于384孔板AusELISAor从自动化洗板到自动化液体处理已经提供了完整且完美的基于解决方案，而AusELISA试剂平台则基于384孔板使高通量、孔板高分辨、重新高内涵的定义ELISA分析变成了现实。

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，析技ELISA）用于IgG定量测定的基于文章。随后的孔板40多年中，ELISA分析技术不断的重新发展以解决和应对临床诊断中遇到的新的问题。如包被蛋白采用基因工程获得的定义重组抗原代替原来的病原体裂解抗原、单克隆抗体代替多克隆抗体，析技及以Hamilton为代表的基于液体处理平台制造商也实现了基于96孔板的ELISA分析的自动化应用。目前，孔板基于96孔板的重新ELISA分析，已经成为一个现代医学实验室检测基本的定义、常规的析技、稳定的检测技术。

然而，由于96孔板通量的限制，为了解决针对不同亚型或者突变所造成的单一蛋白包被“漏检”问题，迫使人们不得不进行“cocktails-ELISA”。为了平衡蛋白间的干扰，“cocktails”中的蛋白不得不丢失一定限度的灵敏度、特异性；并且得到的结果也不是真正意义上实际反应的状态，而是一个“cocktails-result”。而今，实验室诊断将进入“三高”的新阶段，即高通量、高分辨、高内涵。一块384孔板能够同时进行384个测试，通量是96孔板的4倍，且基于384孔板的“SinglePlex-ELISA”，无需平衡蛋白间干扰，从而将“original”蛋白的性能发挥到最大，并能够真实表现每一标志物的真实的反应状态。但384孔板，液体处理及其洗板的自动化实现的困难，限制了我们的选择。

现在，基于384孔板AusELISAor从自动化洗板到自动化液体处理已经提供了完整且完美的解决方案，而AusELISA试剂平台则基于384孔板使高通量、高分辨、高内涵的ELISA分析变成了现实。

AusELISA试剂系统包括AusELISA Quattro 384血筛分析系统，即HIV抗原+抗体Mono分析试剂、HBV抗原+抗体Mono分析试剂、 HCV抗原+抗体Mono分析试剂及梅毒Mono分析试剂，用于血液安全实验室筛查。作为新一代的ELISA检测试剂，区别于第四代试剂的“cocktails-pairs”即混合包被加混合的检测蛋白，“original-pairs”即单蛋白包被搭配对应的单检测蛋白，所产生的超灵敏度和超特异性，使ELISA试剂的“第一窗口期”无限接近核酸检测的“窗口期”，并且能够避免已有证据证明的第四代试剂由于混合包被而产生的“第二窗口期”。

利用“SinglePlex”技术基于384孔板，AusELISA能够带来高分辨和高内涵的分析结果。以HCV抗原+抗体Mono分析试剂为例，在4个不同孔中分别包被了：重组的core抗原、anti-core单克隆抗体、重组的NS5抗原和重组的NS3/4抗原。使其能够在一次分析实验中清楚的分辨出阳性反应的样本是和4个包被蛋白中的哪个蛋白反应，从而真实的“刻画”出这个样本真实的标志物存在状态。同时，也使AusELISA试剂系统成为唯一的能够判断16种不同的标志物存在状态的ELISA检测试剂。表1，清楚地显示了HCV抗原+抗体Mono分析试剂能够分析的16种不同的标志物存在状态组合。

基于同样技术平台的HIV抗原+抗体Mono分析试剂、HBV抗原+抗体Mono分析试剂及梅毒Mono分析试剂，同HCV抗原+抗体Mono分析试剂在分析性能上有同样的优势，在结果分析上也有同样的亮点。这三种试剂的包被蛋白组合，详见表2。HIV抗原+抗体Mono分析试剂，同时检测HIV-1型的p24抗原和抗体，弥补了第四代试剂中不能检测p24抗体而产生的“第二窗口期”；HBV抗原+抗体Mono分析试剂，加入了HBsAb和HBcAb的检测以发现隐匿性乙型肝炎病毒感染（Occult hepatitis B virus Infection,OBI）；梅毒Mono分析试剂检测的4种不同蛋白的抗体覆盖了梅毒螺旋体感染的所有阶段。

表2：AusELISA血筛试剂蛋白包被组合

注：HBsAbD *：针对野生型的HBsAg的单克隆抗体，HBsAbM**：针对突变型的HBsAg的单克隆抗体

好的试剂不应该仅仅有卓越的分析性能，除此之外良好的制造规范也是试剂质量保证的基础。AusELISA试剂系统的生产是在良好的自动化生产规范（Good Automated Manufacturing Practice，GAMP）下进行的，如微孔板的包被是通过世界上第一条全自动微孔板包被生产线完成。AusELISA不但生产过程实现了自动化，而且除蛋白包被的微孔板以外的试剂成分采用“SBS”格式的试剂槽，实现了真正的“Loading-to-Use”（如图1），所有试剂组分的上载仅仅需要不到2分钟时间，使用户从繁琐的实验室操作中解放出来从而能够有更多精力关注于试验本身。

图1： SBS格式包装的AusELISA试剂组分

AusELISA和AusELISAor，不只是一种针对血液安全实验室筛查应用的解决方案，还是一次针对ELISA分析方法的里程碑式“进化”；该平台将ELISA分析“进化到”基于384孔板的“高通量”，基于单蛋白包被的“高分辨”，基于“original-pairs”的“高内涵”的新阶段。

参考文献：

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表1：AusELISA HCV抗原+抗体Mono分析试剂结果分析

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